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| Fixateur sans formol |
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| RCL2®, Fixateur
sans formol |
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| RCL2®, la véritable
alternative au formol pour un meilleur service au Patient |
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La fixation des tissus fait classiquement
appel depuis des décennies à des produits
à base de formaldéhyde tel que le formol
ou l'AFA (alcool+formol+acide acétique). Le formaldéhyde
présente la caractéristique de former des
liaisons covalentes entre les différentes molécules
biologiques, les stabilisant ainsi et inhibant les activités
enzymatiques.
Bien que d'utilisation massive dans les laboratoires de
pathologie et d'histologie humaine ou animale, le formol
et ses variantes présentent deux inconvénients
majeurs bien connus depuis longtemps :
(1) Le formaldéhyde est un produit hautement toxique.
Classé cancérogène de classe I depuis
octobre 2006 par l'OMS, il est démontré
à l'origine avérée de pathologies
respiratoires, d'allergies, et de cancers des voies respiratoires. |
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(2) L'action pontante du formaldéhyde rend l'extraction
des ADNs, des ARNs et des protéines difficiles
voire impossibles en quantité et qualité
suffisantes pour la mise en œuvre de tests prédictifs
de réponse à de nouvelle thérapeutique
ciblée ou pour la recherche moléculaire
qui requiert des molécules de très grande
qualité et en quantité.
Développé depuis 1999 par la Dr Philippe
ROCHAIX, anatomo-pathologiste au Département d'Anatomie
Pathologique du Professeur VOIGT, Centre de Lutte Contre
le Cancer Claudius Regaud, Toulouse, France, le RCL2®
est un nouveau fixateur véritablement innovant
des tissus, préservant les structures tissulaires
et cellulaires. |
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| Rendre toutes les pièces
accessibles à la recherche et au diagnostic moléculaire
pour un meilleur service rendu au Patient grâce
au RCL2® |
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La fixation des spécimens au formol constitue
un frein important à la recherche et au développement
des méthodes moléculaires de profilage
des patients dans la définition des thérapies
ciblées.
RCL2® fixe les tissus en préservant les composantes
histologiques et moléculaires à un haut
niveau de qualité et de contenu.
En changeant pour le RCL2®, vous facilitez l'accès
du Patient aux méthodes thérapeutiques
les plus modernes, ciblées, et efficaces, pour
mieux soigner sans altérer inutilement la qualité
de vie des Patients tout en préservant l'économie
de Santé.
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Adoptez le RCL2® et faites
passer votre laboratoire dans l'ère de l'histo-pathologie
moléculaire. Changer pour un meilleur service au
Patient.
ALPHELYS vous apportera tout le support technique nécessaire
dans l'optimisation de vos protocoles pour vous rendre
la transition plus simple et rapide. |
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| RCL2® permet de combiner
techniques histologiques et moléculaires sur les
mêmes spécimens pour une meilleure efficacité
de la Recherche |
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L'utilisation du formol dans la fixation des tissus
pour le diagnostic et les techniques histologiques contraint
les laboratoires à congeler une partie des prélèvements
pour la recherche moléculaire (voir ci-dessous).
De ce fait, les techniques de biologie moléculaire,
effectués sur les prélèvements
congelés, seront réalisées sur
des tissus différents de ceux sur lesquels le
diagnostic a été formé et où
toutes les analyses histologiques (IHC, FISH…)
ont été réalisées.
La plupart des tissuthèques et tumorothèques
recule devant le contrôle qualité histologique
systématique de tous les fragments congelés
qui requiert de trop importantes ressources.
L'utilisation du RCL2® permet au chercheur de travailler
exactement sur les mêmes pièces que celles
sur lesquelles a été formé le diagnostic
histopathologique et permet d'améliorer l'efficacité
et la précision de la Recherche. Le RCL2®
est le seul fixateur qui produit des spécimens
hautement compatibles avec la biologie moléculaire
après une fixation classique à température
ambiante, sans changer vos procédures.
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RCL2® rend les tissuthèques et tumorothèques
possibles pour tous les laboratoires
Les dégradations occasionnées par la fixation
au formol sur les tissus contraignent les laboratoires à
congeler une fraction des spécimens et à les conserver
à très basse température dans des environnements
coûteux à l'investissement et à l'entretien.
Les propriétés exceptionnelles de fixation du
RCL2® vous permettent d'éviter la congélation.
En une seule procédure de fixation selon un protocole
très classique, vous fixez des tissus qui pourront être
utilisés à la fois pour le diagnostic mais aussi
pour la recherche moléculaire et les techniques d'évaluation
d'éligibilité aux nouvelles thérapies ciblées.
L'utilisation du RCL2® vous permet de simplifier vos procédures
de laboratoire et de réduire vos dépenses.
Les spécimens collectés dans le secteur privé
et qui constituent une part importante du recrutement national
peuvent être fixés sans surcoût par RCL2®
et deviennent alors compatibles pour la Recherche sans investissement.
Les tissus fixés au RCL2® peuvent être conservés
à température ambiante voire à -20°C
lorsqu'une très haute qualité moléculaire
est requise. De ce fait, les budgets requis pour le stockage
sont évidemment bien moindres. L'exploitation est sans
risque et utilise des équipements classiques, d'entretien
bien moins coûteux.
Sans changer vos méthodes de travail, l'utilisation du
RCL2® dans la fixation de vos spécimens est une source
de simplification des méthodes de travail, d'économie
importante et d'accessibilité pour plus de spécimens
pour la Recherche. |
| RCL2®, le seul fixateur
véritablement non toxique pour la Santé
et l'Environnement |
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Les composants du RCL2® ,dont la recette
est protégée par un brevet délivré,
sont réputés et démontrés
sans dangers pour la Santé humaine et l'Environnement
depuis des décennies au regard des règlementations
européennes ou américaines et sont mêmes
autorisés pour l'alimentation humaine.
Le fixateur RCL2® n'a de ce fait aucun risque d'être
un jour classé dangereux contrairement à
nombres d'autres fixateurs sans formol qui pourront vous
être proposés mais qui contiennent des dialdéhydes,
molécule d'activité similaire au formaldéhyde
et pouvant présenter des risques pour la santé.
L'utilisation du RCL2® préserve votre personnel
et l'activité de votre laboratoire en éliminant
le risque pathogène et cancérogène
du formol.
Etes-vous prêt à investir des efforts pour
changer de fixateur en prenant le risque que celui-ci
soit classifié dangereux dans un avenir proche
et qu'une nouvelle réglementation vous oblige à
changer à nouveau ? Faites le vrai choix, pas un
compromis, adoptez RCL2®.
Télécharger la fiche de sécurité
ici.
(Formulaire de demande). |
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Faites des économies budgétaires
avec le fixateur RCL2®
Vous trouvez que les nouveaux fixateurs pour remplacer le formol
sont plus chers que ce dernier ?
Faites votre bilan de coût de revient de manière
globale.
L'adoption de postes de travail adaptés pour réduire
la contamination aérienne de votre laboratoire coûte
cher. Vous devez assurer une surveillance régulière
de votre environnement afin d'éviter la contamination
de votre personnel ou le risque d'un arrêt temporaire
d'activité si un contrôle de la Médecine
du Travail vous met en défaut.
La gestion des déchets, leur collecte et le traitement
par les services d'une société spécialisée
sont également coûteux et engagent votre responsabilité.
Faites votre bilan de manière plus globale et vous constaterez
que le fixateur RCL2® vous permet de faire des économies
de budget significatives tout en garantissant la sécurité
et la simplicité d'utilisation pour vous-même,
vos collaborateurs et votre Environnement.
Achetez-vous de la sérénité avec le RCL2®. |
| RCL2® EN IMAGES |
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| + RCL2® & la
Morphologie |
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RCL2® préserve la
morphologie des tissus et des cellules.
La coloration en H&E présente une morphologie
et des couleurs similaires à celles d'une coupe
fixée au formol.
La morphologie est préservée après
plusieurs années de conservation à température
ambiante comme l'ont montré les essais.
Contrairement au formol qui a une action chimique progressive
et qui continue bien après la fixation lors du
stockage du spécimen, RCL2® a une action immédiate
et complète dès le contact avec le tissu.
Il n'y a pas de dégradations des tissus par le
fait d'une fixation prolongée. RCL2® facilite
ainsi la gestion des fixations des spécimens arrivant
tardivement en fin de journée voire en fin de semaine.
RCL2® produit une dureté agréable pour
la découpe en macroscopie et ne dilue pas l'encre
de Chine que vous pouvez utiliser pour marquer les limites
de résection. |
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Coupe d'un prélèvement de
cancer du sein fixé en RCL2®, colorée
en H&E. |
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| + RCL2® & Immuno-Histochimie |
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RCL2® préserve le
contenu antigénique. De nombreux antigènes
ont été testés avec succès
comme en témoigne la liste ci-dessous.
Sur nombre d'antigènes, l'intensité de signal
obtenue peut être nettement supérieure à
celle obtenue en formol autorisant à une dilution
de l'anticorps et donc des économies. Il peut également
s'avérer que les antigènes ne nécessitent
pas de démasquage, simplifiant encore le travail
et apportant des économies supplémentaires.
Comme dans le cas de tous les fixateurs, il n'est pas
anormal d'avoir à réaliser une légère
mise au point de vos protocoles et en particulier un calibrage
pour vos scorings.
ALPHELYS vous apportera tout le support technique requis
pour vous permettre de réduire au mieux la période
de transition vers RCL2®. |
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Immunomarquage TTF1 clone SPT24 sur tissu
fixé en RCL2®, objectif 10X. |
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Immunomarquage Her2neu sur tissu fixé
en RCL2®, objectif 10X. |
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Immunomarquage CD 30 sur Hodgkin's fixé
en RCL2® et sans démasquage, objectif 40X. |
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- Liste des antigènes validés sur
tissu fixé en RCL2® -
| Antigène |
Clone |
Antigène |
Clone |
| ACE |
polyclonal |
Epithelial Membrane Antigen |
E29 |
| Actine |
|
Estrogen receptor |
6F11 |
| B cell |
DBB42 |
Galectine 3 |
9C4 |
| BCL2 |
124 |
GFAP |
polyclonal |
| Calcitonine |
polyclonal |
Hairy cell |
DBA44 |
| CD3 |
F7.2.38 |
HER2 |
DA0485 |
| CD5 |
DK23 |
HMB45 |
HMB45 |
| CD15 |
80H5 |
Ki67 |
MIB1 |
| CD20 |
L26 |
Kerzin 3 |
|
| CD23 |
|
Kerzin 5 |
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| CD30 |
BerH2 |
Mammaglobine |
304-1A5 |
| CD31 |
JC/70A |
MDM2 |
MDM2 |
| CD34 |
QBEND10 |
Melan A |
A103 |
| CD45 |
2B11 PD7/26 |
Mic-2 |
1,20E+08 |
| CD57 |
NC1 |
Myogenine |
F5D |
| CD68 |
KP1 |
Neurofilament |
2F11 |
| CD68 |
PGM1 |
NSE |
BBS |
| CD 79 |
|
PNL2 |
PNL2 |
| CD 138 |
|
Progesteron receptor |
PgR636 |
| CD 791 |
|
Protein S100 |
DAKO |
| CDK4 |
DSC-31 |
P16 |
E6H4 |
| Cycline D1 |
SP4 |
P21waf |
SX118 |
| Chromogranine |
DAK-A3 |
P27 |
SX53G8 |
| C-Kit |
CD117 DAKO |
P53 |
DO-7 |
| Collagen IV |
CIV22 |
Smooth muscle actin |
1A4 |
| Cytokeratines |
AE1/AE3 |
Smooth muscle actin |
HHF35 |
| Cytokeratines |
KL1 |
Thyroglobulin |
DAKO |
| Cytokeratine 5/6 |
D5/16B4 |
TTF-1 |
SPT24 |
| Cytokeratine 7 |
OVTL12/30 |
Vimentin |
V9 |
| Cytokeratine 8/18 |
CK8/18 |
|
| Cytokeratine 19 |
RCK108 |
| Cytokeratine 20 |
K20.8 |
| D2 40 |
D2 40 |
| Desmine |
D33 |
| EGFR |
Kit DAKO |
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| + RCL2® & Hybridation
In Situ |
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| D'excellents résultats
en CISH et FISH sont obtenus sur des tissus fixés
au RCL2®. Les expressions sont élevées,
les signaux sont spécifiques et le bruit de fond
reste faible. |
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FISH Her2neu sur tissu fixé en RCL2®
objectif 40X. |
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CISH Her2neu sur tissu fixé en RCL2®
objectif 40X. |
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| + RCL2® & ADN |
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| Un tissu fixé
au RCL2® autorise une extraction d'ADN en grande quantité
et de qualité. Les ADNs sont de haut poids moléculaire
et permettent la réalisation d'une PCR également
de grande taille. Les produits PCR peuvent être
séquencés sans difficultés. |
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ADN génomique
Couloir 1 : RCL2®
Couloir 2 : Congelé
Couloir 3 : Marqueur Lambda 20,000 bp max |
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PCR sur 2,4 kpb
Gène BRCA-1
T- Contrôle négatif
R1 Tissu fixé au RCL2®
F1 Congelé
R2 Tissu fixé au RCL2®
F2 Congelé
Lambda marqueur |
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| + RCL2® & ARN |
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RCL2® rend possible des
rendements d'extraction proches de ceux obtenus en congélation
soit environ 100 fois supérieurs à ceux
obtenus à partir de tissu fixé au formol
dans des conditions classiques de fixation et d'inclusion
en paraffine avec une bonne qualité de vos ARN.
Vous pouvez obtenir des ARN de qualité et de quantité
encore supérieures si vous réunissez les
conditions optimales de préservation des ARN à
savoir : réduction du délai entre prélèvement
et fixation (max 15'), fixation au RCL2® à
+4°C, inclusion en paraffine à température
réduite et durée de bains limitée
et conservation à +20°C. |
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Tissu congelé |
Tissu fixé à +4°C par RCL2® |
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| + RCL2® & Protéines |
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| Un rendement d'extraction de
protéines 1000 fois supérieur à celui
obtenu en tissu fixé au formol est rendu possible
sur tissu fixé en RCL2® et inclus en paraffine.
C'est un rendement équivalent à celui obtenu
à partir d'un prélèvement congelé.
Les profils protéiques en gel d'acrylamide, en
1D ou 2D et Western Blot sont similaires à ceux
obtenus à partir de prélèvements
congelés. Les profils SELDI-TOF sont également
semblables. |
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Gel SDS-PAGE
Protéines extraites en tampon Tris 10 mM, SDS 2%,
95°C
Couloir 1 : Marqueur
Couloir 2 : Tissu fixé en RCL2®
Couloir 3 : Tissu congelé
Couloir 4 : Tissu fixé au formol |
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Gel SDS-PAGE
Protéines de différents gènes extraites
en tampon Tris 10 mM, SDS 2%, 95°C
Couloir 1 : Tissu congelé
Couloir 2 : Tissu fixé en RCL2® |
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Profil SELDI-TOF
En haut : Tissu congelé
En bas : Tissu fixé au RCL2® |
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| + RCL2® & Stabilité |
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| Des tests de stabilité
ont été réalisés sur des spécimens
fixés au RCL2®. L'observation de spécimens
fixés au RCL2® et conservés à
température durant plus de 6 ans ne démontre
aucun évolution des caractéristiques morphologiques. |
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A : Ganglion lymphoïde
fixé par RCL2® : morphologie cellulaire
semblable à celle obtenue classiquement avec
les fixateurs formolés.
B : Thyroïde fixée en décembre
1999, coupée et colorée en janvier
2007 : excellente préservation morphologique.
C : Immunomarquage du CD 20 réalisé
sur ganglion fixé en décembre 1999,
coupé et colorée en janvier 2007 :
excellente préservation antigénique.
D : Immunomarquage du CD 3 réalisé
sur ganglion fixé en décembre 1999,
coupé et colorée en janvier 2007 :
excellente préservation antigénique. |
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| + RCL2® : Pas de
changement dans la méthode |
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Le RCL2® se substitue au
fixateur formolé habituel sans changement des techniques
normales de traitement des tissus.
Le temps de fixation est similaire au formol que ce soit
à température ambiante ou à +4°C
et vous pouvez même gagner en flexibilité
car la fixation prolongée des pièces dans
le RCL2® n'apporte pas de dégradations des
tissus contrairement au formol.
La fixation des biopsies peut être pratiquée
dans la plupart des automates de déshydratation
et d'inclusion.
Les spécimens fixés au RCL2® et avec
des produits formolés peuvent être mélangés
dans l'automate. |
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| + RCL2® : Protection
de vos ARNs durant la microdissection laser |
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La récupération
d'ARNS de grande qualité et en quantité
à partir de coupes congelées requiert des
précautions importantes. En effet, dès lors
la coupe déposée sur la lame, la dégradation
des ARNs commence rapidement par la réactivation
des RNAses en présence d'eau.
Il est possible d'utiliser un inhibiteur de protéines
mais la morphologie est généralement fortement
dégradée et complique sévèrement
la reconnaissance des structures, étape essentielle
dans le ciblage lors de la microdissection laser.
L'équipe de l'INRA de Jouy-en-Josas (78) a démontré
que le dépôt d'une goutte de RCL2® sur
une coupe congelée au moment de la dépose
sur lame permet de protéger les ARNs pendant toute
la durée de la microdissection laser et même
au-delà à température ambiante avec
l'atout essentiel de la préservation de la morphologie. |
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| Coupe congelée |
Coupe congelée
avec inhibiteur de protéines |
Coupe congelée
protégée par RCL2® |
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Une véritable alternative à la
fixation au formol est désormais disponible et validée.
Le RCL2® apporte de nombreux bénéfices tant
pour la Recherche, pour l'économie de Santé, pour
l'Environnement que pour le Service au Patient.
Contactez-nous pour tester le RCL2® et faites passer votre
laboratoire dans l'ère de l'histopathologie moléculaire. |
Publications
1. DELFOUR C, ROGER P, BRET C, BERTHE ML, ROCHAIX P, KALFA
N, RAYNAUD P, BIBEAU F, MAUDELONDE T, BOULLE N. RCL2, a new
fixative, preserves morphology and nucleic acid integrity in
paraffin-embedded breast carcinoma and microdissected breast
tumor cells. J Mol Diagn. 2006;8:157-69.
2. LACROIX-TRIKI M, LAMANT L, ALLAL CUIDER B, DECHA A, VOIGT
J-J, ROCHAIX P. RCL2® a new non toxic fixative allowing
extraction of high quality DNA, mRNA and proteins from paraffin
embedded tissues. (En cours de soumission)
Remerciements chaleureux à
Le Dr Philippe ROCHAIX, Institut Claudius Regaud, Toulouse,
France, pour son action essentielle dans l'invention de ce
fixateur génial.
L'Institut Claudius Regaud et tout particulièrement
la Direction Générale d'avoir bien voulu faire
confiance à ALPHELYS pour développer et commercialiser
ce produit.
Mme Claudia BEVILACQUA, Unité de Génomique Fonctionnelle
& Physiologique de la Lactation, INRA, Jouy-en-Josas,
France pour ses travaux et et pour avoir bien voulu nous autoriser
l'utilisation de ses images et résultats.
Dr Nathalie BOULLE, Unité INSERM U540, Hôpital
Arnaud de Villeneuve, Montpellier, France pour ses travaux
et pour avoir bien voulu nous autoriser l'utilisation de ses
images et résultats.
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Ferme des Ebisoires, Impasse Paul Langevin, 78370 Plaisir - France
Tél +33 (0)1 30 07 52 95 - Fax +33 (0)1 30 07 51 56 - Email info@alphelys.com
Copyright © 2001/2007 ,
all rights reserved.
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