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| Hybridation
& Immunomarquage |
| SLIDE BOOSTER® :
Hybridateur Très Grande Vitesse |
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| Immuno-histo chimie - |
Immuno-fluorescence - |
Hybridation Fluorescente In Situ |
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| Coupes de tissus - |
Etalement cellulaire - |
Métaphase |
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Photo d'un Slide Booster® SB400
disposant de 4 chambres d'incubation indépendantes
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Problématique de l'hétérogénéité
des colorations, marquages immunohistochimiques et des
hybridations en milieu non agité
L'hybridation est basée sur l'affinité entre
deux molécules. Plus cette affinité est
forte et plus les molécules vont s'attirer rapidement.
Néanmoins, le nombre de molécules présentes
dans la phase liquide au-dessus d'une lame de microscope
reste très souvent infime en regard du volume.
Du fait de cette dilution, les probabilités de
rencontre entre les molécules actives dans la phase
liquide et les sites d'affinité dans la phase solide
(coupe de tissu, cellules, chromosomes, brins d'acides
nucléiques ou protéines) ne sont pas très
élevées.
Ces probabilités sont augmentées en augmentant
sensiblement la concentration mais les molécules
actives sont souvent coûteuses. La probabilité
de rencontre est également augmentée en
accroissant simplement le temps de contact entre les deux
phases (durée d'hybridation).
En l'absence d'agitation active de la phase liquide, seuls
les mouvements de convection contribuent à multiplier
les contacts entre molécule active et sites d'affinité.
De ce fait, les temps d'hybridation finissent par s'allonger
au détriment du délai au diagnostic médical
ou du délai au rendu de résultats mais l'allongement
de la durée d'hybridation tend également
à contribuer à l'augmentation du bruit de
fond et donc une réduction sensible du ratio Signal/Bruit
rendant plus difficile l'interprétation.
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L'agitation
pour augmenter les probabilités de rencontre entre
les molécules actives et les sites d'affinité
Diverses techniques d'agitation sont proposées
actuellement sur le marché pour favoriser les rencontres
entre les molécules actives mais toutes ces méthodes
sont basées sur des agitations de translation dans
lesquelles les molécules sont agitées parallèlement
à la phase solide augmentant la cinétique
de ces molécules sans pour autant favoriser réellement
les contacts entre molécules actives.
De fait, les résultats sont rarement sensiblement
améliorés.
De plus, l'accès à ces techniques d'agitation
nécessite pratiquement dans tous les cas l'acquisition
de machines souvent coûteuses et par forcément
adaptées au fonctionnement de votre laboratoire
ou à votre activité. |
Le Slide Booster®
garantit une homogénéité, un rendement
et une reproductibilité de marquage exceptionnels
Le Slide Booster® révolutionne les techniques
de marquage avec une technologie extrêmement innovante
de micro-agitation basée sur des puces électroniques
créant des ondes mécaniques d'agitation,
de fréquence ajustable et d'amplitude adaptée
aux déplacements des molécules.
L'autre aspect révolutionnaire de cette technologie
de micro-agitation est son orientation : elle permet l'agitation
des molécules non plus selon un axe parallèle
à la lame mais selon un axe perpendiculaire. Cette
approche présente un avantage important : elle
augmente considérablement le nombre de contacts
entre les molécules actives. Cette approche s'avère
extrêmement efficace non seulement lors de l'hybridation
sur étalement cellulaire ou sur chromosome mais
aussi en coupe de tissus. Dans ce dernier cas, l'agitation
perpendiculaire tendrait à favoriser la pénétration
des molécules actives dans la structure tissulaire
augmentant ainsi le nombre de sites marqués et
donc l'intensité du signal. |
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Démonstration de l'efficacité
de la micro-agitation : à gauche sans micro-agitation
15' après dépôt de 10 µL de
bleu, à droite avec micro-agitation 15' après
dépôt du même volume de bleu. Les
deux expériences ont été menées
à température ambiante.
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| Vue de détail
sur les chambres d'hybridation. On peut nettement voir
les puces d'agitation (flèches). |
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AVANTAGES DE LA TECHNIQUE
DE MICRO-AGITATION
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Votre diagnostic
génétique rendu le jour même !
Les essais récemment réalisés dans
certains laboratoires français de cytogénétique
de référence ont montré des performances
exceptionnelles du Slide Booster® tant vis-à-vis
de la vitesse que de la qualité obtenue.
Les essais ont été conduits en FISH, Peintures,
M-FISH et CGH.
Dans tous les cas, le Slide Booster® a permis de très
fortement réduire les durées d'hybridation
(voir tableau ci-dessous) quelque soient les sondes utilisés
de différents fournisseurs ou de fabrication interne
au laboratoire.
Les durées d'hybridation sont tellement courtes
que le diagnostic rendu le jour même devient enfin
possible !
Le diagnostic préimplantatoire devient bien plus
simple et de plus, compte-tenu des durées d'hybridation
très courtes, vous avez la possibilité d'hybrider,
déshybrider et réhybrider plusieurs fois
en une seule journée afin de tester plusieurs sondes. |
Une plus
grande sécurité dans votre interprétation
Le Slide Booster® vous permet non seulement de réduire
la durée des marquages et hybridations mais aussi
de fortement réduire le bruit de fond et d'augmenter
l'intensité des signaux en réduisant les
faux signaux.
Un bien meilleur rapport signal/bruit est la garantie
d'une interprétation sans erreurs.
Grâce au Slide Booster®, les signaux en télomères
sont bien plus forts et deviennent systématiquement
interprétables, les marquages en onco-hématologie
ne sont plus un cauchemar à interpréter
!
Les marquages immunohistochimiques sont bien plus forts
et contrastés facilitant l'interprétation
et le diagnostic. |
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Démonstration
des performances de marquage obtenues grâce au
Slide Booster®
Différents marquages immunohistochimiques réalisés
sur différents tissus
A gauche : Avec Slide Booster® - A droite : Sans
Slide Booster®
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Marqueur hMLH1
(cliquer pour agrandir)
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Marqueur CD20
(cliquer pour agrandir)
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Marqueur S100
(cliquer pour agrandir)
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Marqueur TS
(cliquer pour agrandir)
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Marqueur VIM
(cliquer pour agrandir)
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Un rendement
de marquage élevé pour une meilleure quantification
de signal
Le Slide Booster® permet d'augmenter considérablement
le nombre de sites hybridés sans augmenter le bruit
de fond. Cela permet d'augmenter favorablement le rapport
Signal/Bruit en facilitant largement l'interprétation.
En augmentant le rendement de marquage, le Slide Booster®
améliore sensiblement la dynamique de votre signal
que ce soit en fluorescence ou en immunohistochimie.
Une meilleure dynamique vous permet de mieux voir les
variations de signaux entre différents essais en
quantification de signal que ce soit en coupe de tissus,
cellules, chromosomes ou micro-array.
Des applications telles que l'analyse de télomères
deviennent systématiquement possibles. |
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Une économie importante
de réactifs et de temps passé en éliminant
les marquages et les hybridations ratées
Le Slide Booster® vous garantit la réussite
de l'hybridation de vos lames qu'elles soient faciles
ou très difficiles à hybrider.
Vous éliminez ainsi les risques de devoir refaire
des lames sur des échantillons souvent précieux
et pour lesquels vous devez rapidement rendre un résultat,
avec des réactifs eux aussi très coûteux
et des ressources humaines limitées.
Le Slide Booster® est un gage de performance, de
qualité et d'économie budgétaire
pour votre laboratoire.
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| Techniques |
Sans Slide Booster®
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Avec Slide Booster®
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| Locus
spécifiques |
6-16 heures
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30 min-2 heures
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| Centromères |
1-2 heures
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10 min
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| Peintures |
16 heures
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2 heures
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| M-FISH |
16 heures
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16 heures
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| CGH
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48 heures
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16 heures
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| Télomères |
16 heures
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2 heures
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Exemples de durées d'hybridation
sur Slide Booster®
*La durée d'hybridation sur la M-FISH n'est pas
améliorée mais le bruit de fond est totalement
éliminé
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Image aimablement fournie par le
Laboratoire de Génétique Médicale
de Martinsried, Allemagne. Grâce au Slide Booster®,
la durée d'hybridation en FISH a pu être
réduite de 16 à 2 heures avec fréquemment
un bien meilleur rapport signal/bruit.
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Pour commander
Slide Booster® SB400 : 4 chambres de dénaturation/incubation
Slide Booster® SB600 : 6 chambres de dénaturation
et 6 chambres d'incubation
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Ferme des Ebisoires, Impasse Paul Langevin, 78370 Plaisir - France
Tél +33 (0)1 30 07 52 95 - Fax +33 (0)1 30 07 51 56 - Email info@alphelys.com
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