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| Microdissection
Laser LCM |
| HistoGene™ LCM
, Kit de coloration des coupes en congélation. |
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Obtenir une coloration supérieure
tout en préservant les ARNs
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| Le colorant HistoGene
est une solution spéciale développée
par ARCTURUS pour colorer les coupes de tissus dans
un but de microdissection laser en vue d'étudier
les ARNs. C'est une coloration très rapide
qui permet d'obtenir un bon contraste par différents
colorants spécifiques du noyau (Violet) et
du Cytoplasme (Rose claire). En minimisant l'exposition
des tissus à l'eau qui peut réactiver
les Rnases, HistoGen permet de préserver
l'intégrité des ARNs qui pourrait
être compromis en utilisant des protocoles
de coloration plus long. |
 
Exemples de tissu préparé avec le
kit HistoGen |
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Colorer et déshydrater simplement
le tissu
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| Le kit de coloration
HistoGene™ pour coupes en congélation
comprend tous les réactifs et accessoires
nécessaires à la préparation
des coupes en congélation pour la microdissection
laser. Les solutions de déshydratation, de
coloration, les conteneurs de lames, des lames spécialement
coatées, sont inclus, ainsi que le protocole
détaillé. Validé pour la Microdissection
laser, le kit HistoGen assure une préparation
constante dans la qualité des échantillons
dédiés à l'étude des
ARNs. |
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| Préserve les ARNs de faible abondance
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Une analyse par RT-PCR de gènes
spécifiques de cellules microdisséquées
à partir d'un tissu congelé
et coloré avec le Kit HistoGen montre
la préservation des ARNs de faible
abondance ainsi que celle des ARNs de plus
forte abondance. Le profil des ARN messager
des échantillons traités par
HistoGen ne montre aucune dégradation.
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Détection des ARNm de faible abundance
dans les échantillons colorés
par HistoGene. Une RT-PCR a été
réalisée sur les ARN extrait
de 500 cellules de foie et de rein de souris
capturées par LCM. Des auntités
égales de cDNA ont été
étudiées avec 3 sets de primers
Stratagène : Elongation Factor 1-a
(EF-1a, gène de forte abondance, ~3000
copies/cell, 187 bp), Glyceraldehyde-3-phosphate
Dehydrogenase (GAPDH, gène d'abondance
moyenne, 300-3000 copies/cell, 357 bp), et
Protein Phosphatase 1 (PP1, gène de
faible abondance, <300 copies/cell, 498
bp). Les échantillons sont analyses
en gel d'acrylamide 6% et colorés par
SYBR Gold Nucleic Acid Gel Stain Molecular
Probes. M: marqueurs de poids moléculaire.
Couloir 1: rein EF-1a. Couloir 2: foie EF-1a.
Couloir 3: rein GAPDH. Couloir 4: foie GAPDH.
Couloir 5: rein PP1. Couloir 6: foie PP1.
Couloir 7 : foie EF-1a, pas de contrôle
RT, Couloir 8: pas de template contrôle
RT. |
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| Préserve l'intégrité
des ARNs |
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Les tissus préparés pour
la LCM utilisant les réactifs du
Kit HistoGen, permettent d'obtenir un bon
rendement et une très haute qualité
des ARNs. Les données obtenues à
partir d'analyses électrophorétiques
de l'ARN total, et des analyses en RT PCR
de gènes spécifiques confirment
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Comparaison d'ARNs isolés
à partir de tissus congelés
colorés (couloir 1) et non colorés
(couloir 2) par HistoGene et microdisséqués.
Le couloir 3 montre un tissu deshydraté
mais non coloré. Analyse électrophorétique
sur Agilent Bioanalyzer 2100. |
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| Utilisé avec d'autres produits
ARCTURUS pour produire des microarrays de
qualité |
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Le kit HistoGen de coloration pour coupes
de tissus congelées est l'un des
produits de la gamme croissante d'ARCTURUS
dédiée pour l'obtention des
puces d'expressions. L'utilisation de Picopure™
RNA pour l'extraction des ARNs, permet l'obtention
d'ARN avec un haut rendement dans un volume
minimum à partir de 10 cellules.
Les quelques nanogrammes d'ARN obtenus en
utilisant ce kit peuvent êtres amplifiés
à quelques microgrammes grâce
à l'utilisation du Kit RiboAmp™
pour l'amplification des ARNs. Ce kit permet
d'obtenir des ARNa prêts pour le marquage
et l'hybridation pour les puces. Utilisés
conjointement avec l'instrumentation ARCTURUS,
les kits augmentent la fiabilité
et la reproductibilité des études
d'expression de gènes en " microarrays
".
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Microarray d'expression d'ARNs
extraits avec PicoPure RNA à partir
de cellules de glomérules et d'uretères
microdisséquées à partir
de tissu coloré par HistoGene et amplifiés
par RiboAmp. L'ARN amplifié est converti
en cDNA marqué Cy5 et hybridé
sur 2 microarrays composés chacun de
3000 EST de souris et scannés. |
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Obtenir une haute qualité d'ARN
à partir de plusieurs types de tissus
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| ARCTURUS a validé
le kit HistoGen en examinant l'intégrité
des ARNs sur différents types de tissus.
Tous les types de tissus testés à
ce jour avec l'utilisation du kit HistoGen ont permis
de récupérer avec un bon rendement,
une excellente qualité des ARNs. |
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Pour usage laboratoire uniquement.
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Ferme des Ebisoires, Impasse Paul Langevin, 78370 Plaisir - France
Tél +33 (0)1 30 07 52 95 - Fax +33 (0)1 30 07 51 56 - Email info@alphelys.com
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