Arcturus
développe des techniques de microgénomique
qui vont des protocoles de préparation des
échantillons, des réactifs et des
instruments permettant de récupérer
une population pure de cellules.
Laser Capture Microdissection (LCM)
:
Le Système de Microdissection Laser PixCell
IIe® est la dernière évolution
du tout premier microdissecteur laser manuel développé
et commercialisé par ARCTURUS dès
1996. Ce système constitue la plus grande
base de microdissecteurs laser installée
dans le monde et a sans aucun doute apporté
une très importante contribution aux travaux
en étude de signatures en biologie moléculaire
sur cellule isolée.
Obtenir des résultats clairs et
précis avec la technique de LCM
:
La Microdissection laser (LCM) permet
d'augmenter grandement la sensibilité et
la précision des analyses moléculaires
à partir d'échantillons composés
d'un seul type de cellules obtenues à partir
de coupe tissulaire ou d'étalement cellulaire.
Cette approche unique de microdissection a été
développée en 1996 par le NIH (National
Institutes of Health) et commercialisée exclusivement
par ARCTURUS et son réseau de distribution,
et permet des études sur les biomolécules
telles ADN, Protéines ou ARN, en garantissant
leur non-dégradation pendant la procédure
de microdissection laser. De nombreuses analyses
moléculaires ont déjà été
publiées dans plus de 300 publications provenant
de laboratoires différents.
L'utilisation du PixCell®
pour réaliser une analyse moléculaire
à partir d'une population pure de cellules
a permis depuis 1996 la publication de plus
de 300 études.
Quatre étapes simples suffisent
pour capturer les cellules et récupérer
les biomolécules.
Après avoir localisé les
cellules d'intérêts, une Macro
CapSure™ ou une CapSure™ HS est
déposée sur la zone cible.
En activant le laser à travers la
capsule, le film thermosensible (EVA) va
coller les cellules recherchées qui
vont alors y adhérer.
En retirant la capsules, les cellules cibles
vont alors se trouver transférées
sous le film.
Les biomolécules sont extraites en
utilisant les chambres d'extraction "
ExtracSure™ " et l'ensemble des
kits ARCTURUS.
La LCM : Utilisée avec tous les
tissus fixés et préparations
cellulaires
La technique LCM permet d'extraire les cellules
aussi bien de coupes incluses en paraffine
que de coupes en congélation, avec
de nombreux types de marquage, de support
et de protocoles.
Isoler des cellules d'intérêts
rapidement et précisément avec
la LCM
La technologie LCM utilise un laser infrarouge
de basse énergie qui permet d'activer
un film plastique (EVA) thermosensible,
au niveau des cellules d'intérêt.
Spécialement développées
pour cette application, les CapSure®
HS et les CapSure® Macro sont recouvertes
avec ce film thermosensible qui est ensuite
placé au-dessus de la coupe de tissu
ou de l'étalement cellulaire.
L'instrument PixCell IIe est utilisé
pour activer directement le film thermosensible
grâce au laser, au niveau des cellules
d'intérêts. Lorsque l'on soulève
la capsule, les cellules sélectionnées
sont alors retenues sous la capsule pour
analyse.
Une cellule unique capturée
par LCM.
Vue en microscopie électronique
d'une capsule HS et d'une cellule
unique capturée par laser.
La technique de LCM maintient de l'intégrité
des biomolécules intracellulaires.
La technologie LCM fournit du matériel
pour une large variété d'analyses
sur ADN, ARN et protéines, y compris
l'analyse d'expression en " Microarrays
".
L'analyse en électrophorèse
démontre l'intégrité
de l'ARN.
Les coupes de rein de souris ont été
colorées à l'aide du
Kit Histogene™ LCM Frozen Section
Staining Kit. L'électrophorèse
est réalisée dans un
Agilent Bioanalyzer 2100.
Couloir 1: ARN total de coupe congelée
non preserve. Couloir 2 : ARN total
de cellules capturées par LCM.
La technique de LCM permet la dissection
de cellules chevauchantes
En séparant les cellules par leurs
interactions naturelles, la technologie
LCM permet de disséquer des cellules
cibles avec une grande précision,
même si les jonctions cellule-cellule
ne sont pas perpendiculaires à la
lame et si les cellules sont chevauchantes.
La LCM trouve ainsi une excellente application
dans les coupes en neurologie où
elle permet la collecte de cellules sans
découpe.
Utiliser la LCM sur des lames de préparations
standards
La technologie LCM offre la possibilité
d'utiliser une large variété
de lames standards pour les techniques d'histologie.
Il est également possible d'utiliser
des lames préalablement montées
et archivées.
Récupérer une structure
unique multi-cellulaire grâce à
la LCM
La microdissection d'une structure multicellulaire
est aussi simple que la dissection d'une
cellule unique. Il est possible de microdisséquer
suivant une ligne, une courbe circulaire
ou non, ou toute autre forme.
Microdissécat d'une hyperplasie
atypique dans un Cancer du sein canalaire.
La technologie LCM n'utilise pas l'inconvénient
du montage sur membrane ou l'utilisation
de lames spéciales qui peuvent introduire
un artéfact au niveau de la morphologie.
Le LCM PixCell IIe : Microdisséquer
des cellules rapidement
La méthode directe de pointage des
cellules avec le laser permet de rendre
la microdissection très rapide. Plusieurs
centaines de cellules peuvent êtres
capturées en quelques minutes.
Avec la technologie LCM, le laser Infra
Rouge n'altère pas la chimie des
échantillons, la morphologie des
cellules ou des tissus. A l'opposé, les techniques
de microdissection par technologie UV altère
le matériel se situant autour des
cellules d'intérêts
La capture des cellules avec le PixCell®
IIe est sûre et directe. En utilisant
les CapSure HS ® ou les CapSure®
Macro, les cellules d'intérêts
sont récupérées directement
de la surface de la lame. Ceci permet de
maintenir un contrôle complet tout
au long de la procédure de Microdissection
laser. Le PixCell IIe n'utilise pas de système
UV pulsé ou tout autre technique
de capture indirecte pouvant entraîner
une perte d'échantillon ou introduire
des charges électrostatiques pouvant
rendre difficile la récupération
des échantillons.
La station d'archivage d'images proposée
avec chaque PixCell IIe fournit une interface
conviviale pour enregistrer et stocker les
différentes étapes de la microdissection
avec la possibilité d'annoter chaque
image. La structure multi utilisateurs proposée
par la station d'archivage d'images est
idéale pour un travail partagé
et en réseau.
Une méthode simple du pointage
du laser
Le PixCell IIe utilise un joystick pour contrôler
les mouvements de la platine avec précision.
L'interface simple rend l'apprentissage d'utilisation
de cet instrument facile et est particulièrement
intéressant pour les plate-formes multi utilisateurs.
Confirmation visuelle des cellules microdisséquées
Afin d'obtenir des données pertinentes,
il est très important d'être
certain de travailler sur le matériel
souhaité. Le PixCell IIe permet de
confirmer l'identité correcte et
la qualité du microdissécat,
rapidement et facilement, avant toute analyse
des biomolécules.
Le système PixCell IIe contient
tous les composants et avantages nécessaires
pour une capture laser précise. Le
système comprend un microscope inversé
pour la Pathologie, une station d'archivage
d'images, un contrôleur du laser,
et un ensemble d'outils pour l'utilisation
des CapSure™. L'option de fluorescence
comprend un ensemble pour épifluorescence
avec collecteur, ainsi qu'un ensemble de
cubes et filtres spécifiques.
Dissection simple des échantillons
en fluorescence
Avec l'utilisation du microscope inversé,
les échantillons sont observés
par en dessous alors que la dissection par
laser est faite par le dessus. Ceci permet
l'utilisation simple de la fluorescence
pendant la dissection avec la possibilité
de changer de filtres.
Du fait que le laser ne passe pas par le
trajet optique du microscope, il est possible
de microdisséquer des cellules avec
la même taille de laser quelque soit
le grossissement utilisé. La refocalisation
du laser lors du changement d'objectif n'est
pas nécessaire.
Coupe de prostate marquée à l'aide
d'un anticorps anti-cytokératine conjugué
à un anticorps marqué avec Cy3.
Le rayon laser est indiqué par la flèche..
Microgénomique : voir ce que vous
avez manqué
Des centaines d'études montrent
comment la technologie LCM augmente la sensibilité
et la précision des résultats.
Une population pure de cellules permet de
voir un phénotype invisible à
partir d'un tissu complet ou dans une population
hétérogène de cellules.
Des centaines d'études montrent
comment la technologie LCM augmente la sensibilité
et la précision des résultats.
Une population pure de cellules permet de
voir un phénotype invisible à
partir d'un tissu complet ou dans une population
hétérogène de cellules.
Gene Expression Profiles of Laser-Captured
Adjacent Neuronal Subtypes.
Luo, Lin et al., Nature Medicine 5(1):117-122,
January 1999.
In Vivo Gene Expression Profile Analysis
of Human Breast Cancer Progression.
Sgroi, DC. et al., Cancer Res., 59:5656-5661,
1999.
Tissu de sein normal
Carcinome du sein
Analyse comparative en microarray entre
un carcinoma du sein et un sein normal.
Ce qui est montré est un gène
unique exprimé uniquement dans les
cellules de carcinome
Augmenter la sensibilité des analyses
de mutations
La technologie LCM augmente la sensibilité
des analyses de mutations ainsi que celles
des analyses de pertes d'hétérozygotie
dans l'instabilité des microsatellites.
High Frequency and Heterogeneous Distribution
of p53 Mutations in Alfatoxin B1-induced
Mouse Lung Tumors. Tam, Andrew S. et al.,
Cancer Research 59:3634-3640, August 1,
1999.
Composite Low Grade B-Cell Lymphomas with
Two Immuno-phenotypically Distinct Cell
Populations Are True Biclonal Lymphomas.
Fend, Falko et al., Journal of Clinical
Pathology 53(9): 666-672, September 2000.
Perte d'hétérozygotie dans les
cellules tumorales dans un cancer du colon. Données
rè-imprimées avec la permission
de Applied Biosystems, Foster City, CA.
LCM améliore votre potentiel de
découverte des protéines up-
et down-regulated dans des études
utilisant l'électrophorèse
en gel 2D, SELDI et spectrométrie
de masse.
Proteinchip surface enhanced laser desorption/ionization
(SELDI) mass spectrometry: A Novel Protein
Biochip Technology for Detection of Prostate
Cancer Biomarkers in Complex Protein Mixtures.
Wright, GL et al., Prostate Cancer and Prostatic
Disease 2:264-276, 1999.
1An Approach to Proteomic Analysis of Human
Tumors. Emmert-Buck, Micheal, et al., Molecular
Carcinogenesis 27(3): 158-165, 2000.
Leader incontesté de la microdissection
laser, ARCTURUS est un pionnier dans la
révolution de la Microgénomique
avec des plateformes complètes de
produits permettant la préparation,
le sélection, et l'analyse de petits
échantillons. ARCTURUS maintient
son avance technologique dans l'analyse
moléculaire en maintenant des développements
constants avec ses équipes d'ingénieurs
et son département Science de la
Vie. En parallèle, ARCTURUS Applied
Geomics , une division de recherche séparée,
partenaire avec des acteurs majeurs de l'industrie
pour développer des tests cliniques
à usage diagnostic basés sur
l'utilisation de technologies ARCTURUS en
microgénomique et microprotéomique.
Tous les appareils sont installés
par du personnel qualifié et formé
par ARCTURUS. Une formation à l'utilisation
est donnée systématiquement
après l'installation avec possibilité
de formation complémentaire. L'équipe
d'experts français est la même
depuis l'introduction de la technologie
ARCTURUS en France.
Un support technique est disponible par
mail, et téléphone. De nombreux
documents et fichiers sont disponibles sur
simple demande. Contactez-nous : pierre.defrenaix@alphelys.com
Nous pouvons vous aider à mettre
en place un protocole en fonction de votre
thématique et de notre connaissance
de plusieurs années dans le domaine
de la microgénomique. . Contactez-nous
: pierre.defrenaix@alphelys.com
Identifier facilement et microdisséquer
précisément des cellules marquées
en fluorescence. L'ensemble de fluorescence
comprend une caméra vidéo
couleur avec boîtier d'intégration,
un ensemble de cubes et de filtres bleus,
verts et rouges, une alimentation pour lampe
100W, une tourelle de filtres, Un filtre
de blocage IR pour la caméra. L'ensemble
de fluorescence n'est disponible que pour
les utilisateurs du pixCell IIe. L'installation
et la formation sont inclus.
