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Microdissection Laser LCM

 Introduction à la technologie Arcturus

Les dernières avancées scientifiques et médicales vont transformer les laboratoires de diagnostic et de recherche.

Les développements dans le séquençage des gènes et les techniques d'amplification, entre autres, permettent maintenant aux scientifiques d'extraire l'ADN ou l'ARN de biopsies tissulaires et de frottis cytologiques pour des analyses moléculaires très précises.

L'efficacité des tests génétiques avancés dépend cependant de la pureté et de la précision de prélèvement des populations cellulaires analysées. La simple homogénéisation d'échantillons de biopsie entraîne l'obtention d'un mélange non spécifique de tissu sain et malade.

L'utilisation d'outils mécaniques pour séparer manuellement les cellules intéressantes à partir de coupe histologique est un processus long qui demande beaucoup de manipulations fastidieuses. Aucune de ces méthodes n'offre la facilité, la précision, et l'efficacité nécessaires pour le diagnostic moléculaire moderne.

Une méthode innovante, la Laser Capture Microdissection (LCM) offre aujourd'hui, aux laboratoires de recherche et d'anatomie pathologique, la technologie idéale pour la microdissection. Le prototype du LCM a été conçu et développé comme outil de recherche au National Institute of Child Health and Human Development (NICHD) et au National Cancer Institute (NCI) du National Institutes of Health (NIH).

Arcturus Engineering, Inc. et le NIH, travaillant dans le cadre d'un accord de développement et de coopération, ont transformé le LCM en instrument de laboratoire aujourd'hui disponible commercialement


La méthode de choix pour la collecte de population cellulaire spécifique :

La technologie LCM utilise un laser Infra Rouge (IR) de basse énergie permettant d'activer un film thermo-sensible se trouvant au dessus des cellules ou du tissu d'intérêt.
Spécialement développées, les CapSure™ HS ou les Macro CapSure™ sont recouvertes de ce film qui se trouve alors au-dessus des zones d'intérêts.
L'appareil dirige le laser à travers la capsule pour activer le film sur les cellules d'intérêts. Ces cellules adhèrent alors au film lorsque la capsule est soulevée du tissu. Les cellules capturées peuvent être extraites du film pour différentes analyses.
Les cellules d'intérêts sont alors micro-disséquées instantanément alors que le tissu environnant reste intact sur la lame.
La capsule peut être placée directement dans un microtube contenant la solution de lyse, pour en extraire l'ADN, l'ARN ou les protéines.
Le laser n'altère pas l'échantillon tissulaire, la qualité des acides nucléiques et des protéines est conservée ainsi que la morphologie des tissus.




Les différentes étapes de la microdissection :


1. Préparation de la coupe
Suivre le protocole de routine de préparation des lames de coupe de tissu ou d'étalement cellulaire, sur une lame de microscope ordinaire. Appliquer PrepStrip™ afin de retirer les éventuels débris sur la lame.


2. Mise en place de la CapSure™
Placer la CapSure™ HS sur le tissu au niveau de la zone d'intérêt. La CapSure™HS est modelée de manière à ce que le film de transfert ne soit pas en contact avec le tissu


3. Capturer les cellules
Activer le laser IR faible puissance. Le laser active le film de transfert qui coule vers le tissu, et rentre en contact avec les zones d'intérêts.


4. Microdissection
Lever la CapSure™ HS avec les cellules d'intérêts qui adhèrent au film de transfert. Le reste du tissu reste intact..


5. Extraction
Emboîter l' ExtracSure™ dans la CapSure™ HS.
L'ExtracSure™ est conçue pour recevoir un très petit volume de solution de lyse dans un environnement propre et non contaminé.

Pipetter le tampon d'extraction directement dans le puit de l'ExtracSure. Placer un microtube à centrifuger pour fermer le tout.


6. Analyse
Après lyse, récupérer le microtube.
Après centrifugation, le lysat est dans le fond du tube. Les cellules contenant ADN, ARN ou protéines sont prêtent pour une étude en Biologie Moléculaire.



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